Actividad antifúngica de aceites esenciales frente a Ascochyta rabiei
bajo condiciones in vitro
Antifungal activity of essential oils against Ascochyta rabiei under in
vitro conditions
Miriam Liliana Velasco Caballero¹*, José Fernando León Paz²
*Autor de Correspondencia: velasco.miriam@usfx.bo
¹ Universidad San Francisco Xavier de Chuquisaca, Bolivia.
https://orcid.org/0000-0001-6131-4925
² Universidad Andina Simón Bolívar. Sucre, Bolivia.
https://orcid.org/0009-0009-0575-6775
Recibido: 30/04/2025 | Aceptado para publicación: 09/06/2025
Resumen
Con el objetivo de encontrar fungicidas naturales sobre la base de
extractos vegetales para el control de enfermedades en los cultivos,
como es la rabia producido por Ascochyta rabiei en el cultivo de
garbanzo, y buscar alternativas para disminuir el uso de biocidas
químico-sintéticos, se llevó a cabo el presente trabajo. Se realizaron
las extracciones de los aceites esenciales de dos especies de vegetales:
molle (Schinus molle) y khoa o muña (Satureja boliviana), mediante
destilación por arrastre de vapor y hacer un screening a dosis de 0.0,7,
1.5, 3.1, 6.2, 12.5 y 25 mg/mL de los aceites. A partir de la
concentración de 1.5 mg/mL del aceite de khoa o muña se obtuvo una
notoria inhibición del crecimiento micelial, siendo del 100%. Con el
aceite de molle (Schinus molle) no se detecta actividad antifúngica
hasta los 12.5 mg/mL contra Ascochyta rabiei, solo se observa actividad
a 25 mg/mL.
With the aim of finding natural fungicides based on plant extracts for
the control of diseases in crops, such as rabies produced by Ascochyta
rabiei in chickpea crops, and looking for alternatives to reduce the use
of chemical-synthetic biocides, it was carried out the present work. The
extractions of essential oils from two species of vegetables were
carried out: molle (Schinus molle) and khoa or muña (Satureja
boliviana), by steam distillation and screening at doses of 0, 0.7, 1.5,
3.1, 6.2, 12.5 and 25 mg/mL of the oils. From a concentration of 1.5
mg/ml of khoa oil, a notable inhibition of mycelial growth was obtained,
being 100%. With molle oil (Schinus molle), no antifungal activity is
detected up to 12.5 mg/mL against Ascochyta rabiei, activity is only
observed at 25 mg/mL.
Ascochyta rabiei es un hongo fitopatógeno causante de la rabia del
garbanzo, una de las enfermedades más destructivas que afectan al
cultivo de garbanzo (Cicer arietinum) a nivel mundial. Esta patología
impacta hojas, tallos y vainas, lo que provoca lesiones necróticas que
reducen significativamente el rendimiento como la calidad del grano
(Okrushko et al. 2025). El manejo convencional de esta enfermedad se
basa en la aplicación de fungicidas sintéticos; sin embargo, su uso
indiscriminado ha dado lugar a la aparición de cepas resistentes, así
como a efectos adversos en el medio ambiente y riesgos para la salud
humana (Burt 2004). En este contexto, los aceites esenciales (AEs) han
surgido como alternativas naturales con un potencial antifúngico,
atribuible a su compleja composición de metabolitos secundarios con
propiedades bioactivas (Bakkali et al. 2008).
Diversos estudios han demostrado la eficacia antifúngica de AEs frente a
A. rabiei. Por ejemplo, el aceite esencial de Cuminum cyminum inhibe la
germinación de esporas que atribuye a compuestos como el cuminaldehído y
el p-cimeno (Holley & Patel 2005). Asimismo, aceites de especies de
Thymus como T. capitatus, T. bleicherianus y T. satureioides han logrado
inhibiciones significativas del crecimiento micelial, debida a la
presencia de timol y carvacrol (Kalemba & Kunicka 2003). Además, el
aceite de Pistacia atlantica mostró una correlación notable entre su
actividad antifúngica y antioxidante, evidenciada por un coeficiente de
determinación del 72.72% (Burt 2004). Del mismo modo, el aceite de
Melaleuca alternifolia (árbol de té) ha sido ampliamente reconocido por
su acción antifúngica, mientras que el de Thymus vulgaris ha mostrado
alta efectividad en la reducción del crecimiento micelial en estudios in
vitro (Carson et al. 2006). Estos hallazgos respaldan el interés
científico por explorar los aceites esenciales como parte de un manejo
integrado, sostenible y ecológicamente viable para el control de A.
rabiei.
Llontop (2008) indica que, en un programa de manejo ecológico de plagas
y enfermedades, el uso de plantas con propiedades biocidas constituye
alternativas para la disminución de los efectos negativos ya
mencionados. Los aceites esenciales extraídos de plantas tienen
diferentes actividades con propiedades farmacológicas y agroquímicas.
Balchin et al. (1995) indican que muchos aceites esenciales extraídos de
plantas tienen gran capacidad antimicrobiana. Por lo anterior el
objetivo del trabajo fue evaluar in vitro el efecto fungicida de aceites
esenciales de S. molle y M. spicata extraídos de plantas contra
Ascochyta rabiei.
Materiales y Métodos
La recolección de muestras vegetales de molle (Schinus molle) y khoa o
muña (Minthostachys spicata) se realizó en las localidades de Yotala y
Punilla, Sucre. El experimento se llevó a cabo en los laboratorios del
CIICA-VC, Facultad de Ciencias Agrarias, Universidad Mayor, Real y
Pontificia San Francisco Xavier de Chuquisaca (U.S.F.X.CH.).
La extracción de aceites (fungicidas naturales) se realizó utilizando un
equipo de destilación por arrastre de vapor, seguida de pruebas de
actividad antifúngica in vitro para evaluar su eficacia y dosis óptima
contra el hongo fitopatógeno Ascochyta rabiei. La metodología se adaptó
de la desarrollada por Flores (1998) en el Instituto de Investigaciones
Farmaco-Bioquímicas (IIFB), Facultad de Bioquímica, Universidad Mayor de
San Andrés (UMSA).
El ensayo consistió en un cribado de los aceites extraídos de las dos
especies vegetales. El medio de cultivo utilizado para el hongo fue agar
patata dextrosa (PDA), con concentraciones de aceite probadas a 0.7,
1.5, 3.1, 6.2, 12.5 y 25 mg/mL, junto con un control (0 mg/mL) sin
aceite, incorporado al medio esterilizado.
La cepa de A. rabiei fue aislada de plantas de garbanzo afectadas por la
rabia de Ascochyta en la región de Escana (Chuquisaca, Bolivia). Las
esporas del hongo se inocularon de manera aséptica en cinco placas Petri
conteniendo medio PDA, las cuales fueron selladas con parafilm e
incubadas a 25°C para obtener un cultivo puro y servir como fuente de
inóculo para los experimentos. Se prepararon medios PDA separados para
cada concentración, con tres réplicas por tratamiento. Un fragmento de
micelio de 5 mm de diámetro se inoculó centralmente en cada placa Petri
y se incubó durante 3 a 9 días.
Las lecturas se realizaron a los seis días de incubación, identificando
las concentraciones y tipos de aceite que inhibieron el crecimiento
micelial (sin crecimiento visible observado). Se seleccionó el aceite
que mostró la mayor inhibición entre las concentraciones; en este caso,
se optó por el aceite de M. spicata debido a la ausencia de inhibición
con el aceite de S. molle. Las concentraciones seleccionadas se
utilizaron posteriormente para evaluar el crecimiento micelial.
Para evaluar la actividad antifúngica del aceite de M. spicata contra el
hongo, se siguieron las recomendaciones de French y Heber (1982). Se
midió el crecimiento radial del micelio en la superficie del medio PDA a
las 72 horas (3 días), 144 horas (6 días) y 216 horas (9 días). Tras
estas mediciones, se calculó el crecimiento medio y se determinó el
porcentaje de inhibición del crecimiento micelial in vitro en relación
con el control.
Resultados
Los resultados de la inhibición de los dos aceites se pueden observar en
la Tabla 1. En el aceite de molle (S. molle) no se detecta actividad
antifúngica hasta los 12,5 mg/mL contra Ascochyta rabiei, solo se
observa actividad a 25 mg/mL.
En la misma tabla se observa que el aceite de Khoa o muña (M. spicata)
presenta mejor actividad antifúngica contra Ascochyta rabiei a partir de
1.5 mg/mL de aceite hasta 25 mg/mL, aunque se nota inhibición mediana a
0.7 mg/mL. Por lo que se decidió continuar el trabajo con el aceite de
khoa.
En el efecto del aceite de khoa o muña (M. spicata) sobre el crecimiento
micelial de Ascochyta rabiei in vitro se observa que a 0.7 mg/mL ejerció
inhibición micelial a las 72 horas (3 días) y se observó crecimiento del
micelio a partir de las 144 horas (6 días), con un aumento del diámetro
de 0.2 cm, obteniéndose 0.7 cm, el crecimiento fue en aumento hasta
llegar a 1.1 cm con un aumento de 0.6 cm a partir del diámetro original
a las 216 horas (9 días) contra 3.1 cm de diámetro del testigo, que
aumento 2,6 cm de diámetro como se observa en la Tabla 2.
Figura 1. Curva de porcentaje de inhibición del crecimiento micelial
de Ascochyta rabiei en las diferentes concentraciones del aceite de
khoa (M. spicata)
Tabla 1. Actividad antifúngica a diferentes concentraciones de los S.
molle y M. spicata aceites extraídos sobre Ascochyta rabiei, - sin
inhibición, + inhibición.
Especie vegetal
25 mg/mL
12.5 mg/mL
6.2 mg/mL
3.1 mg/mL
1.5 mg/mL
0.7 mg/mL
0 mg/mL
S. molle (molle)
+
-
-
-
-
-
-
M. spicata (Khoa)
+
+
+
+
+
+/-
-
Tabla 2. Diámetro de crecimiento del micelio de A. rabiei en las
diferentes concentraciones del aceite de khoa (M. spicata), *diámetro
inicial del inóculo.
Concentración (mg/mL)
72 hrs (cm)
144 hrs (cm)
216 hrs (cm)
0
0.5*
2.0
3.1
0.7
0.5
0.7
1.1
1.5
0.5
0.5
0.5
3.1
0.5
0.5
0.5
6.2
0.5
0.5
0.5
12.5
0.5
0.5
0.5
25
0.5
0.5
0.5
A partir de las concentraciones de 1,5 hasta 25 mg/mL se observa una
notoria inhibición del crecimiento micelial con relación a 0.7 mg/mL y
al testigo durante los 9 días de incubación ya que en las otras
concentraciones mantienen el tamaño del micelio inicial. En el testigo
se observa crecimiento inicial a partir de las 72 horas y el crecimiento
va en aumento hasta las 216 horas.
Calculando el porcentaje de inhibición del aceite sobre del crecimiento
inicial de Ascochyta rabiei observamos en la Figura 1, que el aceite a
0.7 mg/mL tiene un 100% de inhibición a las 72 horas, un 86% a las 144
horas y un 76% a las 216 horas. Por el contrario, a partir de las dosis
de 1.5 a 25 mg/mL se observa inhibición del micelio en el 100% entre las
72 y 216 horas.
De acuerdo con los resultados obtenidos in vitro, del crecimiento
inicial de Ascochyta rabiei con las 6 concentraciones del aceite por la
curva de la figura 1, el aceite de khoa a partir de 1,5 mg/mL ejerce
inhibición del cien por ciento en el crecimiento del micelio del hongo.
Conclusión
El aceite de khoa (M. spicata) mostró mejor actividad antifúngica con
relación al aceite de molle a las diferentes concentraciones contra
Ascochyta rabiei in vitro, lo que podría ser una buena opción para
evaluar su actividad como biofungicida en campo.
Referencias
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Llontop, J., & Panizo, C. (1995). Aportes al manejo ecológico de
cultivos. Red de Acción en Alternativas al Uso de Agroquímicos.
Okrushko, S. E., Verheles, P. N., & Aralova, T. S. (2025). Effect of
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https://doi.org/10.15421/0225001
