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COMPARACIÓN DE MÉTODOS SEMICUANTITATIVOS Y CUALITATIVOS
PARA LA DETERMINACIÓN DE VALORES DE PROTEÍNAS EN ORINA
COMPARISON OF SEMIQUANTITATIVE AND QUALITATIVE METHODS FOR THE
DETERMINATION OF PROTEIN VALUES IN URINE
RIVERO A. Yaritza Mariel, MENDIETA O. Mabel Guadalupe, ECHALAR R. Jhean Carla
Universidad San Fráncico Xavier de Chuquisaca, Facultad de Ciencias Químico Farmacéuticas y Bioquímicas,
Carrera de Bioquímica.
Jheancarlaer@gmail.com
Sucre, Bolivia
Resumen
El análisis de orina es de vital importancia para el diagnóstico y seguimiento terapéutico en pacientes renales y
desde la introducción de las tiras reactivas múltiples, el examen de orina se ha convertido en un procedimiento
sensible y más rápido. El objetivo de la investigación fue la comparación de los métodos Método Cuantitativo -
Colorimétrico del Rojo de Pirogalol y el método Semicuantitativo de Tiras Reactivas para determinar valores de
proteínas en orina en pacientes del Instituto Gastroenterológico Boliviano Japonés de la ciudad de Sucre. La
población de estudio estuvo constituida por un total de 100 pacientes de ambos géneros (56 mujeres y 44
hombres). Se encontró que entre Germanie, Multistix y Biotech no existen diferencias estadísticamente
significativas en cuanto a método cuantitativo colorimétrico rojo de pirogalol, en cambio con Mission, Teco y
Dialab si existen diferencias estadísticamente significativas. También se obtuvo diferencias en la sensibilidad,
especificidad, valor predictivo positivo, valor predictivo negativo y el t-Test, destacándose la marca de tira
reactiva Germanie con 80,28 % de sensibilidad, 100 % de especificidad, 100 % valor predictivo positivo y 67,44
% valor predictivo negativo, seguida de Multistix y Biotech.
Palabras clave: Tiras reactivas, Patologías renales, diagnostico, sensibilidad, especificidad
Abstract
The analysis of urine is of vital importance for the diagnosis and therapeutic monitoring in renal patients and
since the introduction of multiple test strips, the urine test has become a sensitive and faster procedure. The
objective of the investigation was the comparison of the methods Quantitative - Colorimetric of the Pirogalol
Red and the semi-quantitative method of Reactive Strips to determine protein values in urine in patients of the
Bolivian Japanese Gastroenterological Institute of the city of Sucre. The study population consisted of a total of
100 patients of both genders (56 women and 44 men). It was found that between Germanie, Multistix and
Biotech there are no statistically significant differences in terms of red pyrogallol colorimetric quantitative
method, instead with Mission, Teco and Dialab if there are statistically significant differences. Differences in
sensitivity, specificity, positive predictive value, negative predictive value and t-Test were also obtained,
highlighting the Germanie strip test with 80.28% sensitivity, 100% specificity, 100% positive predictive value
and 67,44% negative predictive value, followed by Multistix and Biotech.
Keywords: Reactive strips, renal pathologies, diagnosis, sensitivity, specificity
Recibido en 19 de abril de 2019
Aceptado en 20 de mayo de 2019
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Introducción
El mundo transita por una verdadera epidemia
de las llamadas "enfermedades crónicas no
comunicables": diabetes mellitus, hipertensión
arterial, enfermedad cardiovascular,
enfermedad renal crónica. La Organización
Mundial de la Salud (OMS) estima que estas
son responsables del 60% de las muertes a
nivel mundial. Diversos estudios señalan que
los países menos desarrollados soportan la
mayor carga de este grupo de enfermedades
por dos aspectos, el primero la falta de
recursos humanos y económicos y segundo
por hallarse en una transición epidemiológica.
Los Riñones y el Sistema Genitourinario.- La
orina es filtrada por el glomérulo y recogida en
un espacio confinado por la cápsula de
Bowman. Desde aquí transportada a través del
túbulo contorneado proximal, el asa de Henle y
el túbulo contorneado distal, hacia los túbulos
colectores, los cuales, por medio de la pirámide
medular, desembocan en los cálices renales. La
orina es filtrada principalmente gracias a la
presión hidrostática sanguínea.
Son también factores importantes en la
formación de la orina: 1) la presión osmótica,
que es dependiente en gran parte de las
proteínas plasmáticas de la sangre; 2) la
presión de la propia orina ya excretada, a nivel
del sistema colector. El glomérulo actúa, pues,
como un filtro o criba que separa
determinados corpúsculos y no deja pasar
proteínas. La filtración glomerular supone
aproximadamente 190 litros diarios de
líquido, sin embargo, al pasar el filtrado del
glomérulo a la capsula de Bowman y a los
túbulos, la reabsorción, secreción y excreción
alteran la constitución del producto final y
solamente un 1 por 100 del filtrado total será
excretado como orina en la pelvis renal.
La orina es recogida en la pelvis renal y
progresa, a ondas peristálticas, a través de la
unión uretro-pélvica y del uréter.
En condiciones normales, la orina pasa a través
del orificio uretral solamente en dirección, es
decir, hacia la vejiga. Si la presión vesical
aumenta, el tejido mucoso de la pared interna
del uréter es presionado contra la pared
posterior del mismo, previniendo así el
retorno de la orina, o reflejo besico uretral.
La vejiga es un órgano musculoso hueco,
redondeado, que normalmente puede
distenderse para albergar un contenido de
unos 500 ml. Sin embargo, en ciertas
condiciones, la vejiga puede distenderse más
allá de su normal capacidad. En el hombre, la
cara posterior de la vejiga se sitúa cerca del
recto. En la mujer, la porción superior de la
vagina y el útero se interponen entre la vejiga
y el recto. La cara superior de la vejiga está
cubierta por peritoneo.
1
Insuficiencia Renal.- Se define como
Insuficiencia Renal (IR) a la perdida de función
de los riñones independientes de cual sea la
causa.
Las personas con insuficiencia renal se
someten a diálisis un proceso de limpiar
artificialmente la sangre, o reciben un riñón
sano de un donante en un trasplante renal.
Evolución de la Insuficiencia Renal.- La
Insuficiencia Renal toma años en
desarrollarse. En algunas personas, la
filtración de los riñones funciona mejor de lo
normal durante los primeros años de padecer
diabetes.
Con el paso de los años, en personas que
padecen enfermedad renal, pequeñas
cantidades de albumina (una proteína de la
sangre) empiezan a pasar a la orina.
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Esta primera etapa de la Insuficiencia Renal
Crónica se conoce como micro-albuminuria. A
medida que la enfermedad progresa, pasa más
albumina a la orina. Esta etapa se puede
denominar micro-albuminuria o proteinuria.
El cuerpo retiene algunos materiales de
desecho cuando la filtración se deteriora.
Mientras progresa el daño renal,
frecuentemente aumenta la presión arterial.
La enfermedad renal crónica es un grave
problema de salud pública a nivel mundial, la
prevalencia e incidencia de la Insuficiencia
Renal Crónica Terminal (IRCT) está
aumentando en todo el mundo de forma
acelerada, fenómeno que también está siendo
registrado en Bolivia, puesto que presenta una
elevada morbi - mortalidad, como
consecuencia de la enfermedad cardiovascular
asociada a la perdida de la función renal. El
costo que significa mantener a un paciente en
terapia de sustitución renal como es la diálisis
es extremadamente elevado.
El Programa Nacional de Salud Renal,
dependiente del Ministerio de Salud y
Deportes, fue creado mediante la Resolución
Ministerial Nº 0001 de 6 de enero 2005, con el
único objetivo de controlar estratégicamente
las enfermedades renales a nivel nacional, y
hoy junto a las distintas instituciones y
sociedades médico científicas relacionadas a la
materia, se encuentran preocupados por la
población de pacientes con enfermedad renal
crónica por diversos factores, primero porque
produce gran mortalidad a cualquier edad,
sexo y raza, (siendo 20 veces mayor en
pacientes jóvenes), el hecho de tener IRCT
aumenta el riesgo de morir de un infarto. Se
sabe desde hace años que el hecho de tener
una creatinina elevada aumenta la tasa
acumulativa por infarto a nivel poblacional.
2
Es por esta circunstancia el Programa de Salud
Renal trabaja en base a tres estructuras
importantes: el Programa de Prevención y
Control de Enfermedades Renales, el
Programa de Diálisis y el Programa de
Trasplante, dentro de las tres estructuras el
análisis de orina es de vital importancia para el
diagnóstico de muchos procesos patológicos a
nivel del riñón, vías urinarias y otros órganos.
Desde la introducción de las tiras reactivas
múltiples, el examen de orina se ha convertido
en un procedimiento sensible y más rápido;
actualmente es posible analizar hasta diez
pruebas diferentes en menos de 120 segundos.
Por otra parte, los equipos de lectura
automatizada de tiras reactivas, para
uroanálisis, diseñados para medir la
intensidad de las reacciones y eliminar las
variaciones dadas por el observador,
proporcionan resultados más confiables por la
incorporación de circuitos específicos para la
lectura de la reacción química de cada
elemento.
La presencia de concentraciones elevadas de
proteína en orina, de modo persistente, es un
signo de problema o lesión renal y constituye,
junto con la estimación del filtrado glomerular,
la base sobre la que se sustenta el diagnóstico
de la enfermedad renal crónica (ERC). Su
presencia identifica a un grupo de pacientes
con un riesgo superior de progresión de la
enfermedad renal y con mayor morbilidad
cardiovascular.
El análisis de orina es un procedimiento que se
realiza en el laboratorio de manera rápida y
sencilla, la facilidad en la lectura de las tiras ha
permitido inclusive su uso a nivel del
consultorio, sin embargo, de acuerdo a la tira
reactiva empleada pueden observarse
variaciones, las cuales podrían tener
repercusiones clínicas y terapéuticas
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importantes. Así mismo, aunque no se
cuestiona la utilidad del análisis de orina
mediante tiras reactivas, hay que considerar la
posibilidad de falsos positivos o falsos
negativos. Se observan variaciones en la
lectura cuando se procesan muestras
duplicadas con tiras reactivas de marcas
diferentes, lo que motivó el determinar la
comparación de los métodos para
determinación de valores de proteínas en
orina para la evaluación de la Sensibilidad y
Especificidad del método Semicuantitativo de
Tiras Reactivas de orina frente al método
Cuantitativo Colorimétrico Rojo de Pirogalol
Método
La población de estudio estuvo constituida por
un total de 100 pacientes del Instituto
Gastroenterológico Boliviano Japonés Sucre,
de ambos géneros (56 mujeres y 44 hombres)
de los cuales se recopilaron datos de los
valores de proteínas en el examen general de
orina.
Los procedimientos para el análisis de orina
abarcaron tres fases:
Fase pre analítica:
1.- Indicaciones al Paciente:
Realizarse un previo aseo de los genitales
externos con una solución antiséptica
suave.
El recipiente para recolectar la muestra fue
entregado al paciente (limpio, estéril y
desechable); el mismo debió ser
previamente rotulado.
Eliminar el primer chorro de orina y
recolectar el chorro medio en el recipiente
proporcionado por el laboratorio.
Inmediatamente llevar al laboratorio
acompañado de la solicitud médica
debidamente llenada en el lapso de 1 hora.
2.- Recepción y Rechazo de la Muestra: Para la
recepción de muestras se aplica lo descrito en
el procedimiento de ¨Recepción de muestras
para exámenes de laboratorio¨ donde se
describen las actividades propias de esta
etapa. El laboratorio realiza exámenes de
rutina en horario hábil, luego de este periodo,
las muestras recepcionadas son procesadas de
acuerdo al listado de exámenes.
3.- Criterios de rechazo de muestras: Fueron.
Muestras sin rotular.
Envase incorrecto con respecto a los
exámenes solicitados.
Volumen de orina insuficiente.
Transporte inadecuado de la muestra o
demora en su envió.
Muestra derramada o con rotura del
envase.
Si la muestra cumplía con los requisitos de
calidad, los exámenes fueron realizados en el
transcurso de la jornada.
Fase Analítica:
1.- Análisis Químico
Semicuantitativo: Se realizó con las seis tiras
reactivas de orina pre seleccionadas.
Para realizar el examen químico de las orinas,
utilizamos tiras reactivas, para trabajar con
ellas tenemos que tener en cuenta los
siguientes encisos:
Almacenamiento:
Se almaceno a temperatura inferior a 30°C. No
exponer el producto a la luz directa del sol.
Proteger contra la humedad.
La protección contra la humedad, luz y calor
del medio ambiente es esencial para mantener
la reactividad de las tiras. La decoloración u
oscurecimiento de las áreas puede indicar
deterioro.
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Procedimiento:
Quitar la tapa del frasco, sacar una tira y
colocar nuevamente la tapa. Sumergir
completamente las áreas reactivas de la tira a
la muestra y retirar inmediatamente para
evitar que se disuelvan los reactivos.
Al momento de sacar la tira deslizar el borde
de la tira contra el canto del recipiente para
eliminar el exceso de orina. Mantener la tira en
una posición horizontal para prevenir posibles
mezclas de los reactivos y/o contaminar las
manos con orina.
Comparar las áreas reactivas con la
correspondiente escala de color de la carta
adherida al frasco en los tiempos
especificados. Mantener la tira cerca de los
bloques de color y comparar cuidadosamente.
Cuantitativo: Se realizó mediante el método
cuantitativo colorimétrico rojo de pirogalol.
La muestra de orina se centrifugo a 3500 r.p.m.
durante cinco minutos, al cabo del tiempo se
trabajó con el sobrenadante.
Procedimiento:
Llevar a temperatura ambiente los reactivos y
las muestras antes de iniciar el ensayo. Tomar
tres tubos de ensayo y proceder como sigue:
Blanco
Prueba
Estándar
Muestra
-
50 ul
-
Agua
desionizada
50 ul
-
-
Estándar
(nº2)
-
-
50 ul
Reactivo de
Color (nº1)
1 ml
1 ml
1 ml
Mezclar y poner en baño de agua (37 ºC) por 5
minutos y leer las absorbancias de la prueba y
del estándar en 600 nm (580 a 620 nm),
elevando el aparato a cero con el blanco. La
absorbancia es estable 30 minutos.
Calculo de los resultados:
Proteínas en orina al azar:
Proteína (mg/dl) =
𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑃𝑟𝑢𝑒𝑏𝑎
𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑑𝑒𝑙 𝐸𝑠𝑡𝑎𝑛𝑑𝑎𝑟
x 50
Valores de referencia:
Orina al azar: 15 a 45 mg/dL
Se realizó la medición de las pruebas de las
tiras reactivas donde se anotó en la primera
hilera las marcas respectivas de cada tira
reactiva (Ver Anexo N° 2), la segunda hilera
significa que salió negativo para proteínas en
orina, 15 significa la cantidad de mg/dl al igual
que 30, 100, 300, 2000 en función a esto se
anotó el resultado numérico que cuyos valores
se obtuvieron por las diferentes marcas de
tiras reactivas; mientras que en la tercera
hilera se anotó el valor numérico que se obtuvo
de acuerdo al método cuantitativo
colorimétrico del Rojo de Pirogalol que los
valores son entre 1 – 174 mg/dl.
Fase Post Analítica:
Evaluar resultados mediante métodos
estadísticos.
Análisis estadístico El recuento de la
información fue realizado de forma manual
para su posterior tabulación o conteo
mediante el paquete estadístico EXCEL y
fórmulas de Sensibilidad, Especificidad, Valor
Predictivo Positivo y Valor Predictivo
Negativo, para la comparación de ambos
métodos, así mismo se concluyó el estudio
realizando una comparación y ver si existían
diferencias estadísticas en los datos
semicuantitativos, se utilizó el programa
SigmaPlot y la prueba de t-Test comprobando
la normalidad de datos con el Test de Shapiro–
Wilk.
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Resultados
Tabla 1. Tiras reactivas para orina utilizadas con mayor frecuencia por laboratorios.
MARCA DE TIRA REACTIVA
FRECUENCIA
Frecuencia Absoluta N°
Frecuencia Relativa %
Mission
27
37%
Germanie
11
16%
Multistix
9
13%
Teco Diagnostics
9
13%
Dialab
6
8%
Biotech
4
6%
Invernes
3
4%
Nerf
2
3%
Total
70
100%
La tabla 1 describe la preferencia de marcas de tiras reactivas utilizadas por los laboratorios de Sucre
Bolivia
80,28
77,42
74,65
74,65
64,79
56,34
100
96
100
100
100
100
G E R M A N I E
M U L T I S T I X
B I O T E C H
M I SS I ON
T E C O
D I A L A B
SENSIBILIDAD ESPECIFICIDAD
Gráfico 1. Comparación de la sensibilidad y especificidad de tiras reactivas de orina.
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Gráfico 2. Comparación de valor predictivo positivo y negativo de tiras reactivas de orina.
Tabla 2. Resumen comparativo
La tabla 2 muestra que entre Germanie,
Multistix y Biotech no existen diferencias
estadísticamente significativas en cuanto a
método cuantitativo colorimétrico rojo de
pirogalol, en cambio con Mission, Teco y Dialab
si existen diferencias estadísticamente
significativas. También figura 1 y 2 muestran
diferencias en la sensibilidad, especificidad,
valor predictivo positivo, valor predictivo
negativo y el t-Test, destacándose la marca de
tira reactiva Germanie con 80,28 % de
sensibilidad, 100 % de especificidad, 100 %
valor predictivo positivo y 67,44 % valor
predictivo negativo, seguida de Multistix y
Biotech
Discusión
SENSIBILIDAD
ESPECIFICIDAD
VPP
VPN
t-Test p=0,05
GERMANIE
80,28
100
100
67,44
0,061
MULTISTIX
77,42
96
98,21
63,64
0,08
BIOTECH
74,65
100
100
61,7
0,059
MISSION
74,65
100
100
61,7
0,029*
TECO
64,79
100
100
53,7
0,009*
DIALAB
56,34
100
100
48,33
< 0,001*
100
98,21
100 100 100 100
67,44
63,64
61,7 61,7
53,7
48,33
0
20
40
60
80
100
120
GERMANIE MULTISTIX BIOTECH MISSION TECO DIALAB
VPP VPN
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Los resultados muestran la utilidad de las tiras
reactivas, sin embargo, el hecho de observar
una correlación moderada sobre todo en
proteínas, es de particular importancia ya que
la proteinuria es un marcador temprano de
enfermedad renal grave en hipertensos,
diabéticos y se ha asociado con incremento en
el riesgo de enfermedad cardiovascular.
Se ha realizado una encuesta aplicada a los
laboratorios de la ciudad de Sucre para
identificar las seis marcas más empleadas de
tiras reactivas de orina donde Mission,
Germanie, Multistix, Teco Diagnostics, Dialab y
Biotech fueron las más utilizadas. Un 49% de
los laboratorios de la ciudad de Sucre afirman
que para la elección de una determinada marca
de tira reactiva de orina fue escogida por su
sensibilidad donde la marca de tira reactiva
Mission obtuvo un 37 % de acuerdo a la
encuesta.
Aunque dijeron que la marca de tira reactiva
Mission y Germanie fueron los más
seleccionados por su sensibilidad, pero resulta
que de acuerdo a los resultados obtenidos del
análisis de sensibilidad y especificidad de las
diferentes marcas de tiras reactivas frente a la
comparación del método cuantitativo
colorimétrico rojo de pirogalol, la marca de tira
reactiva Germanie es más sensible con el
80,38% y con una especificidad del 100%
respecto al programa estadístico utilizado t-
Test.
Los métodos más usados para la confirmación
de proteínas en orina de acuerdo a los
laboratorios de la ciudad de Sucre tienen como
fundamento el Rojo de Pirogalol, donde el
método Colorímetro Winner es el más
accesible en cuanto a costo.
Para la comparación del presente estudio se
utilizó el método Colorimétrico Reactivo de
Sensiprot por la accesibilidad del Laboratorio
I.G.B.J.
Por
lo tanto, los datos obtenidos en este trabajo
sugieren la necesidad de implementar métodos
laboratoriales en la determinación de proteinuria
en el examen general de orina que permitan
incrementar la detección de proteinuria en los
pacientes y disminuir los falsos positivos o falsos
negativos,
se determinó la prueba de
Sensibilidad y Especificidad , dos parámetros
muy importantes para dar relevancia al
estudio realizado ya que la validación de
métodos requiere mínimamente estos
parámetros en donde tiene que existir un
grado de concordancia del resultado obtenido
donde se pudo recolectar los resultados de
Sensibilidad de la marca de Tira Reactiva
Germanie que es más sensible con el 80,38% y
con una especificidad del 100%, seguida de
Multistix, Biotech, Mission, Teco Diagnostics y
Dialab respecto al programa estadístico
utilizado t-Test.
Conclusiones
Se efectuó la comparación de características
esenciales de ambos métodos, teniendo como
resultado valores de sensibilidad y
especificidad del método semicuantitativo de
tiras reactivas usando formulas respectivas
para cada una, así conocer la variación que
existe entre diferentes marcas respecto a los
valores obtenidos para proteínas. En donde la
marca de tira reactiva Germanie resulto ser de
mayor sensibilidad y especificidad para la
determinación de proteínas en orina.
La marca más empleada de tira reactiva de
orina cuyo resultado se aproxime más al
resultado obtenido por el Método Cuantitativo
Colorimétrico Rojo de Pirogalol es Germanie.
Se identificó que en la incidencia de pacientes
que asistieron al laboratorio del Instituto
Gastroenterológico Boliviano Japonés durante
el estudio en los meses de abril a septiembre
del año 2018, fueron 100 pacientes externos
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que presenta un 56% al sexo femenino y 44%
son de sexo masculino.
Según la comparación de los métodos para
determinación de valores de proteínas en
orina: método cuantitativo colorimétrico rojo
de pirogalol y el método semicuantitavo de
tiras reactivas de orina para realizar la
constatación de los valores mediante el
programa estadístico t-Test se ha podido
encontrar que entre Germanie, Multistix y
Biotech no existen estadísticamente
diferencias significativas en cuanto a método
cuantitativo colorimétrico rojo de pirogalol, en
cambio con Mission, Teco y Dialab si existen
estadísticamente diferencias significativas.
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